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天津本生—DMEM(低糖)的注意事項和使用步驟
DMEM培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。
與MEM比較增加了各種成分的用量,同時又分為高糖型(低于4500gm/L)和低糖型(低于1000mg/L)。
DMEM低糖培養(yǎng)基用于養(yǎng)干細(xì)胞可防分化,DMEM高糖可養(yǎng)大多數(shù)哺乳動物的細(xì)胞。
注意事項:
1、培養(yǎng)及長期放置,需要2-8℃避光保存,請勿低溫凍存。
2、培養(yǎng)基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定、易分解,長期放置后使用若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長變慢可以在使用前加入適量的L-谷氨酰胺,來維持細(xì)胞正常代謝。
3、含有NaHCO3的培養(yǎng)基開瓶次數(shù)較多后培養(yǎng)基內(nèi)的CO2會逐漸溢出,PH值上升,培養(yǎng)基的顏色會偏紫色。
培養(yǎng)基偏堿性會造成細(xì)胞生長停滯或死亡,建議分裝成小瓶使用或用HEPES調(diào)整至正常PH范圍。
DMEM(低糖)使用步驟:
1、準(zhǔn)確稱量試劑:根據(jù)不同菌類的用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
2、校正PH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線、加熱溶解、補充水分、測定酸堿度,常用PH6.8-8.0的精密試紙或酸度計測定。
用1NNaOH和1NHCI調(diào)節(jié)PH值到適宜范圍內(nèi)。
3、過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用DMEM低糖紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
4、分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。
5、滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。
一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽孢有較強的抗熱性,需經(jīng)高壓蒸氣滅菌才能達(dá)到滅菌的目的。
根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。
因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。
而在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
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