本生快訊：ELISA實(shí)驗(yàn)不可忽視的細(xì)節(jié)—酶標(biāo)板

　　根據(jù)不同的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，酶標(biāo)板有著不同的分類(lèi)，下面BUSNEN本生技術(shù)小編詳解如下：

　　一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用，目前市面上的酶標(biāo)儀最多為96孔，因此酶標(biāo)板最為常用的也是96孔。

　　二、根據(jù)其底部的不同，又分為平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，適于在酶標(biāo)儀檢測(cè);U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標(biāo)儀上，直接通過(guò)目測(cè)觀察顏色變化情況，從而判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)。V底的酶標(biāo)板可以精確的吸取樣品。

　　三、根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同，又分為高結(jié)合力、中結(jié)合力和氨基化等。

　　1)高結(jié)合力

　　此種酶標(biāo)板，表面經(jīng)處理后，其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng)，可達(dá)300~400ngIgG/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類(lèi)酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)?？乖蚩贵w包被后，以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。

　　(2)中結(jié)合力

　　此類(lèi)酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合，適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結(jié)合能力為200~300ngIgG/cm2。由于該類(lèi)酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類(lèi)板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

　　(3)氨基化

　　這種酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類(lèi)酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，其表面可通過(guò)離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween20等去污劑的蛋白分子。該類(lèi)板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無(wú)法結(jié)合;此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。

　　四、根據(jù)顏色可分為透明、黑色、白色。

　　透明的是常用的，用于最一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)。相對(duì)于透明的的酶標(biāo)板，還有用于發(fā)光檢測(cè)用的不透明的酶標(biāo)板，一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會(huì)有光吸收，所以它的信號(hào)相對(duì)于白色酶標(biāo)板要低很多，因此一般用于檢測(cè)較強(qiáng)的光，如熒光檢測(cè)。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測(cè)，常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來(lái)的問(wèn)題。同時(shí)需要注意的是，用一般的酶標(biāo)板不可以進(jìn)行發(fā)光檢測(cè)，因?yàn)橐话銖幕瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性，如果用透明的酶標(biāo)板，光不僅會(huì)從垂直方向發(fā)散，還會(huì)從水平方向發(fā)散，使得光極易通過(guò)各個(gè)孔之間的間隙和孔壁，從而導(dǎo)致各孔的光吸收值受到相鄰孔發(fā)射光的影響。

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