BUNSEN資訊| ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置及注意事項

　　ELISA試劑盒的空白孔設(shè)置步驟如下：

　　1. 空氣空白\水空白：一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。

　　2.底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值(只加底物和終止液)

　　3. 酶空白：一般在2步法實驗中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的，一般不做這個 。

　　ELISA試劑盒空白孔一般設(shè)一個，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標準品最好是設(shè)2個復(fù)孔，雖然有點浪費，但為了確保實驗的可靠性，我認為還是很有必要的。ELISA試劑盒空白孔加什么?一般兩個做法，看個人習(xí)慣或者說看你們實驗室的習(xí)慣：

　　1，什么都不加，然后那個孔按照操作流程來做，這個說法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒有。

　　2，加樣本稀釋液，然后按照操作流程來做。這個做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個孔除了在沒有陽性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。

　　ELISA試劑盒注意事項：

　　1、血清標本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。

　　2、 血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

　　3、一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫?yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。

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